Selectarea indicatorilor biologici pentru testarea eficacității dușurilor cu ceață: Geobacillus stearothermophilus vs Bacillus atrophaeus

Selectarea indicatorului biologic greșit pentru un test de calificare a unui duș chimic nu se anunță ca un eșec în timpul testului - se anunță la un audit sau în timpul unei revizuiri de reglementare a pachetului OQ, moment în care fiecare rezultat din lotul respectiv devine de nejustificat. Întreaga calificare trebuie repetată în raport cu organismul corect, cu un prag de acceptare adecvat, înainte ca sistemul să poată fi considerat validat. Acest tip de refacere poate fi evitat, dar numai dacă decizia de selectare a indicatorului este luată pe baza mecanismului și nu pe baza familiarității cu indicatorii utilizați în altă parte în instalație. Ceea ce urmează este o descriere precisă a organismului care se aplică testării dușurilor chimice, a motivelor pentru care alternativa produce date înșelătoare și a lacunelor fizice și procedurale din metodologia de plasare care tind să compromită rezultatele surselor punctiforme înainte ca acestea să ajungă vreodată la o revizuire a documentației.

De ce este importantă selectarea speciilor biologice indicatoare pentru validarea decontaminării chimice - și de ce selectarea greșită produce date invalide

Modul de eșec în acest caz este specific: o instalație cu un program stabilit de calificare pentru abur sau VHP atinge OQ pentru duș chimic și trece la Geobacillus stearothermophilus deoarece se află deja pe lista materialelor aprobate, este deja înțeles de echipa de microbiologie și este deja asociat cu validarea riguroasă a sterilizării. Logica pare sigură. Dar nu este.

Profilul de rezistență a sporilor de G. stearothermophilus este calibrat la provocările termice și oxidative. Rezistența sa excepțională la căldură - proprietatea care îl face organismul de referință pentru sterilizarea cu abur - nu spune nimic despre modul în care va răspunde la hipoclorit de sodiu sau acid peracetic la concentrațiile și timpii de contact utilizați într-un ciclu de duș chimic. După cum au demonstrat cercetările privind validarea decontaminării efluenților chimici, mecanismele de rezistență ale bacteriilor formatoare de spori sunt specifice fiecărui mecanism: o specie care supraviețuiește căldurii umede sau peroxidului de hidrogen vaporizat poate să nu fie mai rezistentă la dezinfectanții chimici decât un organism mult mai puțin robust, în timp ce invers este de asemenea adevărat. Atunci când G. stearothermophilus este testat cu un sistem de duș chimic pe bază de hipoclorit de sodiu, acesta poate arăta o distrugere adecvată - dar acest rezultat reflectă sensibilitatea chimică inerentă a organismului respectiv în acele condiții, nu o afirmație validată că sistemul ar inactiva organismele calibrate în funcție de rezistența chimică. Un rezultat de trecere este posibil tocmai pentru că organismul testat a fost alegerea greșită, nu pentru că sistemul s-a dovedit eficient.

Consecința în aval a acestei substituiri rămâne de obicei ascunsă până când pachetul OQ este analizat în raport cu raționamentul chimic al procesului. În acel moment, neconcordanța fundamentală - un indicator rezistent la căldură utilizat pentru validarea unui sistem cu acțiune chimică - face ca setul de date să fie dificil de apărat. Repetarea calificării nu este cel mai rău rezultat; cel mai rău rezultat este un sistem pus în funcțiune pe baza unor date invalide și un eveniment de expunere care scoate la suprafață diferența înainte de orice revizuire formală.

Bacillus atrophaeus ca BI de referință pentru validarea dușurilor chimice: obiective de reducere log și cerințe de plasare

Bacillus atrophaeus (anterior Bacillus subtilis var. niger) este indicatorul biologic de referință pentru validarea decontaminării chimice, deoarece profilul său de rezistență a sporilor este calibrat în funcție de provocarea chimică, mai degrabă decât de mecanismele termice sau oxidative. Pentru sistemele de duș chimic cu hipoclorit de sodiu și acid peracetic, o reducere de 6 log a B. atrophaeus sporii este criteriul standard de acceptare utilizat în calificarea operațională. Acest prag este în concordanță cu practicile consacrate de validare a proceselor și oferă o măsură cantitativă justificabilă a eficacității dezinfectantului în condiții definite de concentrație și timp de contact - o abordare aliniată la principiile generale ale FDA pentru validarea proceselor, care subliniază că OQ trebuie să confirme că un proces îndeplinește în mod constant parametrii de ieșire definiți.

Cifra de 6-log este un prag de proiectare a procesului, nu o cifră extrasă dintr-un singur document de reglementare. Importanța sa provine din locul pe care îl ocupă în logica mai largă a validării procesului: dacă sistemul realizează o reducere de 6 log față de organismul de referință în cele mai nefavorabile condiții de plasare și de ciclu, există o bază rațională pentru încrederea în eficacitatea rutinei. Instalațiile care stabilesc un criteriu de acceptare mai scăzut fără o justificare documentată a motivului pentru care strictețea redusă este adecvată se confruntă cu o discuție mai dificilă în timpul revizuirii OQ decât cele care documentează baza pentru pragul standard.

Locul de amplasare este cel în care criteriul devine dificil din punct de vedere practic. Obținerea unei reduceri de 6 log la o bandă de testare situată pe o suprafață de fixare aproape de o duză de pulverizare nu este același lucru cu obținerea acesteia într-o locație anatomică definită pe o țintă de mărimea unei persoane, în special în locații care prezintă provocări geometrice sau poziționale pentru acoperirea completă a pulverizării.

Tabelul de mai sus surprinde parametrii esențiali, dar judecata care contează cel mai mult este următoarea: criteriul de acceptare înseamnă ceva numai dacă benzile se aflau efectiv în pozițiile definite de evaluarea riscului de contaminare în momentul rulării ciclului. O bandă găsită pe podeaua camerei de duș la sfârșitul testului nu este un punct de date - este o abatere de protocol care anulează ciclul pentru acea locație, indiferent de ceea ce arată cultura recuperată.

Geobacillus stearothermophilus și de ce nu se aplică la testarea dușurilor chimice: diferențe între mecanismele de rezistență

Distincția de rezistență dintre aceste două organisme nu este o chestiune de grad - este o chestiune de mecanism. G. stearothermophilus este selectat ca indicator de referință pentru sterilizarea cu abur și ciclurile VHP, deoarece conținutul de acid dipicolinic, compoziția proteică a învelișului sporilor și proprietățile structurale aferente îi conferă o stabilitate excepțională la căldură și la acțiunea oxidativă. Aceleași proprietăți structurale nu conferă o rezistență echivalentă la chimia oxidativă a clorului din hipocloritul de sodiu sau la chimia acidului organic din acidul peracetic la concentrațiile utilizate în ciclurile de duș chimic. Organismele nu sunt interschimbabile între tehnologiile de dezinfecție, la fel cum un cupon de testare a rezistenței la coroziune nu este interschimbabil cu o probă de rezistență la tracțiune.

Criteriul de planificare care rezultă din aceasta este simplu: selectarea indicatorului trebuie să fie determinată de mecanismul decontaminantului, nu de disponibilitatea unei specii convenabile deja utilizate în altă parte în instalație. G. stearothermophilus este alegerea potrivită pentru VHP și sistemele de decontaminare pe bază de abur. Pentru dușuri chimice OQ care implică hipoclorit de sodiu sau acid peracetic, B. atrophaeus este standardul de referință.

Riscul identificat în tabel - rezultate care nu confirmă eficacitatea împotriva agentului chimic - merită să fie luat în considerare, deoarece nu este teoretic. A G. stearothermophilus populația de spori supusă unui test cu hipoclorit de sodiu la concentrații standard de duș poate fi ucisă eficient, producând un rezultat curat din punct de vedere numeric pe care un examinator neavizat l-ar putea confunda cu un OQ de trecere. Problema este că rezultatul nu are nicio legătură mecanică cu procesul validat. Acesta nu răspunde la întrebarea la care OQ ar trebui să răspundă. Evaluatorii de reglementare și auditorii familiarizați cu știința validării dezinfecției vor identifica imediat neconcordanța; costul nu este doar calificarea repetată, ci și întrebările de credibilitate din aval pe care le ridică cu privire la rigurozitatea programului mai larg de validare.

Metodologia de plasare a indicatorilor biologici: poziționarea benzilor, proiectarea dispozitivelor și procedurile de prelucrare post-test

Integritatea pozițională este condiția fizică care face ca datele privind eficacitatea sursei punctuale să fie semnificative. O bandă plasată într-un loc anatomic definit - partea interioară a antebrațului, partea posterioară a gâtului, partea inferioară a spatelui - este poziționată acolo deoarece evaluarea riscului de contaminare a identificat locul respectiv ca fiind o suprafață cu risc ridicat în timpul ieșirii dintr-un mediu periculos. În cazul în care banda se deplasează în timpul ciclului de pulverizare, rezultatul log-reducerii recuperat de pe banda respectivă nu mai este asociat cu locul pe care trebuia să îl reprezinte. OQ poate afișa în continuare cifre, dar cifrele nu răspund la întrebarea pentru care au fost concepute.

Provocarea cea mai constantă în obținerea integrității poziționale constă în faptul că modelele standard de camere de duș, inclusiv multe sisteme disponibile în comerț, nu includ un dispozitiv conceput pentru a menține benzile de indicatori biologici în locații definite pe suprafața corpului în timpul unui ciclu activ de pulverizare. Deseori, echipele de calificare planifică protocolul de testare în jurul hărții corporale de evaluare a riscului de contaminare, apoi ajung la cameră și descoperă că nu există niciun mecanism de fixare a unei benzi la nivelul gâtului posterior al unei ținte de mărimea unei persoane fără ca aceasta să se deplaseze sau să cadă sub presiunea pulverizării. Această lacună nu este evidentă în etapa de redactare a protocolului; devine evidentă doar în timpul unei simulări a testului sau, mai rău, în timpul simulării OQ efective, atunci când poziția benzii nu poate fi confirmată după ciclu.

Pentru Duș Qualia Bio's Mist În ceea ce privește sistemele OQ, problema proiectării dispozitivului de fixare ar trebui abordată în etapa de planificare a calificării, nu după ce ciclul de pulverizare a fost executat. Echipele care integrează cerința de fixare în protocolul OQ ca o condiție prealabilă - în loc să o trateze ca pe un detaliu logistic - evită scenariul de repetare a execuției care rezultă din benzi dislocate.

Tehnica de fixare a benzii are propriile implicații asupra integrității datelor. Banda de vinil aplicată astfel încât adezivul să intre în contact numai cu marginea benzii, departe de zona de testare inoculată, împiedică chimia adezivului să interfereze cu recuperarea sporilor sau cu cinetica de inactivare la suprafața de testare. Acesta este un detaliu operațional mai degrabă decât o cerință de conformitate, dar modul de eșec pe care îl previne - contaminarea cu adeziv a locului de inoculare - poate produce rezultate anormale care sunt dificil de explicat la revizuirea post-test.

Procesarea post-test introduce un al doilea set de riscuri. Recuperarea benzilor dintr-un mediu cu duș chimic, transferul lor în medii de creștere fără contaminarea încrucișată a laboratorului de prelucrare și interpretarea corectă a rezultatelor culturii necesită același nivel de disciplină procedurală ca și plasarea în sine.

Etapa de subpasaj - luarea unui rezultat aparent negativ al unei culturi și pasarea acestuia a doua oară înainte de a-l declara un rezultat negativ adevărat - este o practică riguroasă care reduce probabilitatea de rezultate fals negative atribuibile populațiilor de spori cu creștere lentă sau stresate. Aceasta nu este impusă în mod universal pentru toate aplicațiile, dar în contextele OQ în care un rezultat fals negativ ar certifica în mod incorect un sistem ca fiind validat, etapa suplimentară de procesare este o măsură de protecție proporțională. Instalațiile care o omit pentru că adaugă timp de procesare schimbă o mică economie de timp cu un risc semnificativ mai mare de rezultat fals pozitiv în înregistrarea OQ.

Compromisul dintre indicatorii pe bază de benzi și suspensiile lichide de spori aplicate pe suprafețele PPE se regăsește în fiecare decizie practică din această lucrare. Benzile oferă date mai clare, cuantificabile, specifice locației și se integrează în mod natural cu amplasarea pe bază de dispozitiv. Suspensiile lichide oferă o acoperire mai largă a suprafeței și pot simula mai îndeaproape distribuția reală a contaminării, dar introduc complexitate în etapa de prelucrare post-test: recuperarea unui preparat lichid de spori de pe o suprafață EPI după un ciclu de pulverizare, fără a crea un eveniment de contaminare secundară în laboratorul de prelucrare, necesită o manipulare mult mai atentă decât recuperarea benzilor. Niciuna dintre abordări nu este categoric superioară - alegerea depinde de ceea ce încearcă să demonstreze calificarea și dacă laboratorul de prelucrare poate susține metodologia de recuperare în condiții de siguranță.

Documentare și criterii de acceptare: înregistrarea rezultatelor testelor BI în protocolul OQ și ceea ce constituie un lot de trecere

O înregistrare OQ care documentează o reducere de 6-log a B. atrophaeus fără a documenta, de asemenea, pozițiile benzilor, parametrii ciclului, concentrația chimică la momentul testului și lanțul de prelucrare post-test prezintă lacune care sunt dificil de acoperit retrospectiv. Criteriul de acceptare este un număr, dar caracterul justificabil al acestui număr depinde în întregime de documentația aferentă care stabilește că numărul a fost produs în condițiile specificate în protocol.

Protocolul OQ ar trebui să identifice fiecare poziție a benzii printr-o referință definită - locația suprafeței corpului, punctul de fixare a dispozitivului sau ambele - și să asocieze fiecare rezultat recuperat cu poziția respectivă. Un lot care trece este un lot în care fiecare poziție definită îndeplinește criteriul de reducere de 6 log, concentrația chimică și timpul de contact au fost în limitele validate, iar pozițiile benzilor au fost confirmate la începutul ciclului și luate în considerare la sfârșitul ciclului. Orice poziție care nu poate fi confirmată că a rămas în locația sa desemnată în timpul ciclului trebuie tratată ca o abatere de protocol și documentată în consecință, în loc să fie absorbită în liniște în setul de date de trecere.

Ghidul FDA privind validarea proceselor subliniază faptul că faza OQ trebuie să genereze dovezi obiective că parametrii procesului produc în mod constant un rezultat care îndeplinește criteriile prestabilite. Pentru validarea dușurilor chimice, aceasta înseamnă că înregistrarea OQ trebuie să susțină un argument cauzal clar: decontaminantul, la această concentrație, cu acest timp de contact, administrat în aceste poziții, a produs acest rezultat de reducere logaritmică împotriva acestui organism de referință. Lacunele din orice parte a acestui lanț slăbesc argumentul, chiar dacă rezultatele finale ale culturii par curate.

Interpretarea rezultatelor culturii necesită aceeași rigoare ca și testul fizic. Rezultatele aparent negative ar trebui verificate prin subpasare înainte de a fi înregistrate ca negative confirmate în lotul de acceptare. Această etapă suplimentară necesită timp, dar elimină riscul ca o populație de spori stresată - vie, dar cu o creștere lentă în condițiile inițiale de cultură - să fie considerată ca un rezultat negativ. Un fals negativ introdus în înregistrarea OQ ca negativ confirmat transformă un rezultat negativ într-un rezultat pozitiv fără ca cineva să observe, până când un test repetat sau un audit scoate la iveală discrepanța. Documentarea etapei de subpasaj, inclusiv a rezultatului celui de-al doilea pasaj, creează o înregistrare care poate fi auditată, conform căreia rezultatul negativ a fost verificat și nu presupus.

Lotul OQ trebuie tratat ca fiind admis numai în cazul în care toate pozițiile definite dau rezultate negative confirmate, toți parametrii ciclului sunt în conformitate cu specificațiile și toată documentația de plasare este intactă. Trecerile parțiale - unele poziții îndeplinesc criteriile, altele nu - indică fie o problemă de acoperire cu sistemul de pulverizare, fie un eșec al metodologiei de plasare, fie o abatere a parametrilor ciclului, fiecare dintre acestea necesitând un răspuns corectiv diferit înainte de recalificare.

Cea mai importantă decizie în cadrul unui program de validare a dușurilor chimice este luată înainte de plasarea primei benzi de testare: care organism și de ce. O instalație care răspunde corect la această întrebare - Bacillus atrophaeus pentru sistemele cu hipoclorit de sodiu sau acid peracetic, cu o reducere de 6 log ca prag de acceptare - construiește un set de date OQ justificabil de la prima încercare. O instalație care atinge G. stearothermophilus pentru că este deja cunoscută, nu va descoperi problema până când nu va fi examinată justificarea chimică, moment în care lotul de calificare nu va conține nicio afirmație valabilă cu privire la eficacitatea chimică.

Înainte de finalizarea protocolului OQ, confirmați că designul dispozitivului poate susține benzile în toate pozițiile definite de evaluarea riscului de contaminare în condiții de pulverizare activă, că metoda de fixare a benzii protejează suprafața inoculată de interferența adezivului și că procedura de procesare post-test include o etapă de verificare a subpasajului pentru negativele aparente. Aceste trei elemente - selectarea speciilor indicatoare, integritatea pozițională și verificarea rezultatelor - sunt cele care fac diferența între un pachet OQ justificabil și o recalificare costisitoare.

Întrebări frecvente

Î: Poate o unitate să utilizeze benzi de testare a concentrației de acid peracetic ca substitut pentru testarea indicatorului biologic în timpul OQ pentru duș chimic?
R: Nu - verificarea concentrației chimice și testarea indicatorului biologic răspund la întrebări diferite și nu se pot înlocui reciproc. Confirmarea faptului că decontaminantul a atins concentrația specificată într-un anumit punct vă spune că produsul chimic a fost livrat; nu vă spune dacă acel produs chimic, la acea concentrație și timp de contact, a produs reducerea logară necesară împotriva organismului de referință în locații definite ale suprafeței corpului. OQ necesită ambele: documentația parametrilor ciclului și o reducere confirmată de 6 log a Bacillus atrophaeus sporii pentru a stabili dacă sistemul funcționează conform destinației în condițiile de calificare.

Î: Dacă pozițiile benzilor se deplasează în timpul ciclului de pulverizare, iar tirajul nu poate fi confirmat complet, trebuie anulat întregul lot OQ sau numai pozițiile afectate?
R: Doar pozițiile a căror plasare nu poate fi confirmată trebuie tratate ca abateri de la protocol - dar aceste abateri trebuie documentate și nu pot fi absorbite în setul de date de trecere. În cazul în care un loc anatomic critic definit de evaluarea riscului de contaminare se află printre pozițiile neconfirmate, acest decalaj poate fi suficient pentru a împiedica declararea lotului ca fiind complet admis, în funcție de modul în care protocolul definește cerințele de acoperire. Calea corectivă este de a rezolva mai întâi problema de proiectare a dispozitivelor, apoi de a reanaliza pozițiile afectate, mai degrabă decât de a reanaliza întregul lot, cu condiția ca protocolul să permită această abordare și ca abaterea să fie documentată pe deplin.

Î: În ce moment creșterea concentrației chimice sau a timpului de contact elimină necesitatea testării indicatorului biologic, făcând ca rezultatul să fie o concluzie inevitabilă?
R: Nu există nicio concentrație sau prag de timp de contact la care testarea BI poate fi eliminată pe baza faptului că rezultatul este presupus. Logica validării procesului necesită dovezi obiective, nu rezultate presupuse - o concentrație mai mare poate scurta timpul de distrugere, dar nu elimină obligația de a demonstra o reducere log confirmată față de organismul de referință în condiții reale de ciclu. În plus, concentrațiile foarte mari de hipoclorit de sodiu introduc considerații legate de compatibilitatea materialelor și de siguranța personalului care limitează măsura în care parametrii ciclului pot fi crescuți, ceea ce face ca testarea empirică a BI în condiții realiste de funcționare să fie mai importantă, nu mai puțin.

Î: Testarea suspensiei de spori lichizi este preferabilă indicatorilor pe bază de benzi pentru OQ-ul dușurilor chimice sau introduce prea multe riscuri de prelucrare post-test pentru a fi practică?
R: Suspensiile lichide sunt preferabile atunci când obiectivul de calificare este demonstrarea unei acoperiri largi a suprafeței, mai degrabă decât a eficacității sursei punctiforme în locuri anatomice definite - de exemplu, atunci când evaluarea riscurilor identifică contaminarea distribuită a suprafeței ca fiind principala preocupare, mai degrabă decât pozițiile specifice cu risc ridicat. Compromisul este real: suspensiile lichide produc date mediate pe suprafață care pot reflecta mai bine distribuția reală a contaminării, dar recuperarea lor de pe suprafețele EPI după un ciclu de pulverizare fără a crea un eveniment de contaminare secundară în laboratorul de prelucrare necesită o manipulare mult mai controlată decât recuperarea benzilor. Faptul că datele cu acoperire mai largă justifică această sarcină suplimentară de procesare depinde de modelul de risc specific pe baza căruia se efectuează validarea în cadrul instalației.

Î: Cum ar trebui să trateze o unitate un lot OQ în care cele mai multe poziții ale benzilor returnează rezultate negative confirmate, dar o locație semnificativă din punct de vedere anatomic prezintă o cultură pozitivă după sub-passage?
R: Un singur rezultat pozitiv confirmat într-o locație definită înseamnă că lotul nu trece, iar rezultatul trebuie investigat înainte de recalificare, în loc să fie atribuit unei anomalii aleatorii de procesare. Primul pas este să se stabilească dacă eșecul se datorează unei lacune de acoperire în sistemul de pulverizare, unei probleme de plasare a benzii în locul respectiv sau unei abateri de la parametrii ciclului în timpul execuției - fiecare necesită un răspuns corectiv diferit. O problemă de acoperire a sistemului de pulverizare poate necesita ajustarea duzei sau reproiectarea ciclului; o defecțiune de plasare a benzii se referă la proiectarea dispozitivului de fixare; o abatere de la parametru necesită înăsprirea controalelor ciclului. Recalificarea fără identificarea cauzei principale riscă să repete aceeași defecțiune în același loc.